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蛋白層析柱的再生、平衡是什么?

發布時間:2022-07-13瀏覽:371次

  蛋白層析柱是凝膠層析技術中的主體,我們研究所用的就是同興玻璃儀器,一般用玻璃管或有機玻璃管。根據樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數不同,從而分離的一種層析法。
 
  蛋白層析柱的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,直徑大于2厘米,但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外,直徑加大,洗脫液體體積增加,樣品稀釋度大。分離度取決于柱高,為分離不同組分,凝膠柱床要有適宜的高度,分離度與柱高的平方根相關,但由于軟凝膠柱過高擠壓變形阻塞,一般不超過1米。
 
  層析柱是凝膠層析技術中的主體,一般用玻璃管或有機玻璃管。層析柱的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,直徑大于2厘米,但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外,直徑加大,洗脫液體體積增加,樣品稀釋度大。
 
  將一定量薄層層析硅膠裝入搪瓷盤置于烘箱中,于105。C活化2H后,取出放置室溫即可裝柱。柱子采用干法填充,填滿整個柱體,不留死體積,密封后用柱塞式計量溶劑泵按丙酮一石油醚(5:95)比例泵入溶劑,至溶劑流出止。
 
  有效成分經TLC檢識全部流出后,用純丙酮5000ML再生,丙酮一石油醚(5:95)平衡后,可再次上樣,反復使用(使用次數隨原料不同而異,一般可連續使用2—6個月以上)。

 

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